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纖維素酶DNS酶活力測定方法

一 準備工作

精確稱取1 g 酶粉，用蒸餾水定容到200ml，配制5g/L的稀釋酶液。 準備好新華1號濾紙條，規格：1cm Χ 6cm。 配備pH = 4.8的醋酸緩沖溶液。 按照下表配備3，5-二硝基水楊酸試劑（DNS試劑）：二 標準葡萄糖曲線繪制（吸光度值與葡萄糖含量線性回歸）按下表1-1各取1 mg/ml標準葡萄糖液、3，5-二硝基水楊酸試劑（DNS試劑）：表1-1在沸水浴中反應15 min，冷卻后定容到25 ml，在λmax = 550nm下，用分光光度計測量吸光度值，以吸光度值為縱坐標，葡萄糖量為橫坐標，繪制標準曲線。或用Excel進行相應的線性回歸。

三 濾紙酶活力測定

將新華1號濾紙一條放入有標準刻度的試管中。 精確加入1.8 ml pH = 4.8醋酸緩沖溶液。 精確加入5g/L的稀釋酶液0.2 ml，搖勻。 在50±1℃水浴中保溫反應60min。 保溫反應結束，精確加入3ml DNS試劑。 放入沸水浴中反應15min（注意：將8空白對照液同浴反應）。 冷卻后加入蒸餾水定容到25ml。 空白對照液的配制： (1)精確加入0.2ml稀釋酶液。(2)精確加入1.8 ml pH = 4.8醋酸緩沖溶液。(3)放入新華1號濾紙一條。(4)精確加入3ml DNS試劑。(5)隨同對照樣，放入沸水浴中反應15min(注意：參見操作步驟6)。(6)冷卻后加入蒸餾水定容到25ml。

9．以空白對照液調零點，在λmax = 550nm下，用分光光度計測量吸光度值。濾紙酶活力 = A × 5 × 200 × 1000 / 60 （u/g）A 吸光度值在標準曲線上對應的葡萄糖量（mg）。