經Cu2+處理后H2O2預處理條件選擇各因子水平如下: A——反應溫度(℃) A1=40 A2=55 A3=70; B——H2O2(30%)濃度(ml/L) B1=10 B2=20 B3=40 C——反應pH值 C1=5.5 C2=7 C3=8.5; D——反應時間(min) D1=30 D2=60 D3=90 由極差數據:各因子對減量率的重要性依次為:D>B>A>C,即最重要的反應條件為時間,H2O2濃度次之,再有溫度。可見,在相同酶處理條件下,減量率受H2O2反應中影響因素的主次順序與影響二硫鍵減少的一致。即隨著時間的延長和H2O2濃度的增加,Cu2+-羊毛催化H2O2分解生成HO.的量急劇增加,二硫鍵的量快速下降,減量率快速增加。因此進一步證明了預處理對蛋白酶催化水解羊毛的促進作用主要在于破壞二硫鍵。H2O2的氧化作用、氯劑的氧化作用、Na2SO3還原作用都會對胱氨酸的二硫鍵產生一定的破壞作用(反應如式3-1,3-2),有利于蛋白酶分子的進攻,這與前面的試驗結果相符。氧化:
(3-1)還原:
(3-2)3.3.3 再通過單因子試驗證明這種趨勢,反應時間是較重要的影響因素 ①浸Cu2+條件:Cu2+處理C=5ppm,T=55℃,pH=5.5~6.0,t=20min浴比1∶50;H2O2處理T=55℃,C=20ml/L,pH=6~7,浴比1∶25。 ②不浸Cu2+處理條件:H2O2處理T=55℃,C=40ml/L,pH=11.0~11.5,穩定劑4.5g/l,浴比1∶25。 ③酶處理條件同上。 由圖5可見,Cu2+-羊毛復合物與濃度為20ml/L的H2O2反應作預處理,再經酶處理的減量率隨時間的
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